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    無血清凍存液的一般凍存步驟分享

    發(fā)布時間： 2021-11-05　　點擊次數(shù)： 2367次
     　　無血清凍存液可即開即用，方便省時。無血清成分，化學(xué)成分明確。快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍。高復(fù)蘇活率，有效保護細(xì)胞。
    　　無血清凍存液的一般凍存步驟如下：
    　　1.選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，在凍存前一天最好換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。
    　　2.去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為3×106-1×107/mL之間。
    　　3.將上述細(xì)胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤校碴逞b1-1.5mL在火焰噴燈上封口，封口處要*封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時作好登記（日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù)）。
    　　4.將裝好細(xì)胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi)；置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：
    　　先將安瓿置入4℃冰箱中2-3小時，再移至冰箱冷凍室內(nèi)3-4小時（此步可省略），再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時，最后沉入液氮中。
    　　細(xì)胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，最好取出一只安瓿細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
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