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    B 淋巴細(xì)胞膜表面免疫球蛋白的檢查

    發(fā)布時(shí)間： 2023-04-12　　點(diǎn)擊次數(shù)： 781次

    原理

    SmIg 是B 細(xì)胞的抗原識(shí)別受體，也是B 細(xì)胞特異的表面標(biāo)志，用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標(biāo)記的抗Ig 抗體，在一定條件下與淋巴細(xì)胞混合，熒光素標(biāo)記的抗Ig 抗體可以與B 細(xì)胞表面的Ig 結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察可見B 細(xì)胞膜上出現(xiàn)熒光。此方法可用來鑒定B 淋巴細(xì)胞。

    材料與儀器

    ICR 小鼠
    異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的兔抗小鼠Ig 抗體 Hank's液
    臺(tái)式離心機(jī) 離心管 吸管 移液管

    步驟

    1. 采用頸椎脫臼法處死小鼠，解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目鋼網(wǎng)研磨，混勻。從中吸取1 ml細(xì)胞懸液放入一試管中，加滿Hank's液，離心1000 rpm，10 分鐘，洗滌細(xì)胞一遍。傾去上清，沉積的細(xì)胞恢復(fù)1 ml容積，即為約1x107/ml的細(xì)胞懸液。另取一支試管，吸取1x107/ml的細(xì)胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即為1x106/ml的細(xì)胞懸液。
    2. 取2 ml離心管兩只，各加入1x106 /ml的細(xì)胞懸液1 ml，用臺(tái)式離心機(jī)離心2000 rpm，3 分鐘，棄去上清液。一支加入熒光素標(biāo)記的兔抗鼠Ig抗體100 ul，另一支不加抗體作對(duì)照，置4 ℃冰箱30 分鐘。
    3. 取出離心管，用Hank's 液洗滌細(xì)胞兩次，以去除游離的抗體，最后一次離心后棄去上清液，留少許回流液，混勻，滴片，用熒光顯微鏡觀察。

    注意事項(xiàng)

    一、在滴片前要去除游離的抗體，以避免假陽(yáng)性結(jié)果。



    常見問題

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    熒光顯微鏡觀察，落射激發(fā)光下SmIg 陽(yáng)性細(xì)胞可見環(huán)狀或斑點(diǎn)狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計(jì)數(shù)同一視野內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)，共計(jì)數(shù)200～300 個(gè)淋巴細(xì)胞，算出其中SmIg 陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。


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