銷售熱線

19126518388

  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置：首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 免疫熒光抗體法

    免疫熒光抗體法

    發(fā)布時(shí)間： 2023-01-05　　點(diǎn)擊次數(shù)： 767次

    原理

    用人結(jié)腸癌細(xì)胞為免疫原，免疫小鼠，制得鼠抗人結(jié)腸癌細(xì)胞表面抗原（Ag）的單克隆抗體 IgG（第一抗體），二者可以發(fā)生特異性的抗原抗體反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物，再加入市售（也可自制）的熒光標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體（第二抗體），可以與復(fù)合物進(jìn)一步發(fā)生抗原抗體反應(yīng)（二次抗體反應(yīng)），這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結(jié)腸癌細(xì)胞表面的存在。

    材料與儀器

    HeLa細(xì)胞
    1640培養(yǎng)液 小牛血清 甲醛固定液 PBS 液體石蠟
    蓋片 載片 培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)皿 濾紙 鑷子 吸管 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 微量加樣器

    步驟

    1.  將培養(yǎng)瓶中的結(jié)腸癌細(xì)胞接種到裝有蓋片的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)2~3天。

    2.  在倒置鏡下觀察到蓋片上的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好后，在蓋片左上角用玻璃筆做一下標(biāo)記，以免在以后的操作中正反面顛倒。

    3.  將蓋片放在甲醛固定液中，4℃固定5~10分鐘。

    4.  用PBS洗三次，注意不要將PBS液直接倒在蓋片的細(xì)胞面，以免引起細(xì)胞大量丟失。用濾紙片將蓋片上的PBS輕輕吸干，不要損傷細(xì)胞層。

    5.  將已稀釋好的小鼠抗體滴在蓋片上．每個(gè)蓋片50 ul，37℃溫育30分鐘。

    6.  用PBS洗三次，濾紙吸干。

    7.  將已稀釋好的熒光標(biāo)記羊抗鼠二次抗體5ul滴加在蓋片上，37℃溫育30分鐘。

    8.  用PBS洗三次，濾紙吸干。

    9.  將載片上滴一滴液體石蠟。然后將蓋片細(xì)胞面朝下放到載玻片上，在熒光顯微鏡下觀察。


    以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。


    安培生物科技有限公司介紹：

    安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)



產(chǎn)品中心 Products