細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

原理：

通過 脂質(zhì) 體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法及電穿孔等基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將靶基因?qū)爰?xì)胞，一般在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)左右，靶基因即可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?8小時(shí)后即可進(jìn)行靶 基因表達(dá) 的檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)。

應(yīng)用：

觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（短時(shí)間即可進(jìn)行觀察，但效應(yīng)會(huì)很快丟失）。

一般流程：

1）細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80%覆蓋。

2）細(xì)胞轉(zhuǎn)染（脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE6等）

3）48小時(shí)以后鑒定目的基因的表達(dá)情況。

前期準(zhǔn)備：

構(gòu)建好的外源基因載體，或目的基因基本信息。

待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（1×106個(gè)細(xì)胞，可傳代，倍增時(shí)間小于48小時(shí)）以及 細(xì)胞培養(yǎng) 條件的說明。

若需要檢測(cè)靶基因的表達(dá)，請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng) 抗體 。

結(jié)果呈現(xiàn)：

構(gòu)建好的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析。

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