如何提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率？

提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟，目的都是為了避免產(chǎn)生會(huì)被細(xì)胞內(nèi)吞、加工失效的大顆粒沉淀。

提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些：

1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上，以大分子作為運(yùn)載體，能提高轉(zhuǎn)染效率。

2、測試緩沖液適合的ph，可制備幾批pH范圍為6.90～7.15的HEPES鹽緩沖液，分別測試緩沖效率，找到最適pH值。

3、使用轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑，如甘油、氯喹、其他可購買的轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑。因?yàn)檫@些試劑對(duì)細(xì)胞有一定毒性，因此，應(yīng)針對(duì)每種細(xì)胞系通過實(shí)驗(yàn)確定轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑處理的最佳時(shí)機(jī)、時(shí)長和強(qiáng)度。

除了這些共通的步驟，不同廠家還會(huì)對(duì)混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動(dòng)，有些建議用移液器溫和吹吸混勻，有些則提倡應(yīng)緩慢混合。

因此，在使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染時(shí)，應(yīng)針對(duì)不同試劑和細(xì)胞系，耐心調(diào)整實(shí)驗(yàn)參數(shù)，才是獲得高轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵。