6個(gè)小細(xì)節(jié)，輕松搞定細(xì)胞“劃痕實(shí)驗(yàn)”

傷口愈合試驗(yàn)，也通常稱為“劃痕試驗(yàn)"，是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。細(xì)胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。其實(shí)驗(yàn)原理是，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。

條件好的實(shí)驗(yàn)室可使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動(dòng)。結(jié)合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時(shí)間的速度，但是使用延時(shí)顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

通常，用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。較為常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

那么制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意些什么呢？

1. 細(xì)胞的密度；劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合，但是每種細(xì)胞的生長(zhǎng)速度會(huì)不一樣，所以需要按照細(xì)胞的生長(zhǎng)特性調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)胞鋪滿孔底時(shí)劃痕的效果會(huì)比較好，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時(shí)盡量垂直，以6孔板為例 ，一個(gè)孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細(xì)胞

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基，因?yàn)椋簞澓酆笥脽o血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，意在說明在監(jiān)測(cè)的 24 小時(shí)內(nèi)，劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果，所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到最小低；但若細(xì)胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5. （5）放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。我們按0，10，12，15時(shí)間點(diǎn)取樣，拍照(具體時(shí)間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

6. （6）統(tǒng)計(jì)方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計(jì)算細(xì)胞間距離的平均值。