凍存細(xì)胞的這些坑，你踩過(guò)嗎？

凍存細(xì)胞的錯(cuò)誤時(shí)機(jī)主要有：細(xì)胞量太少，細(xì)胞狀態(tài)不好，細(xì)胞變形嚴(yán)重，或者細(xì)胞生長(zhǎng)堆積，一旦生長(zhǎng)過(guò)平頂期，培養(yǎng)基就會(huì)變得很黃，細(xì)胞可疑污染；鏡下觀察細(xì)胞有很多碎片或者不明物；培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，連續(xù)培養(yǎng)超過(guò)二個(gè)月，細(xì)胞性狀已有改變。

選擇細(xì)胞凍存的最佳時(shí)機(jī)：細(xì)胞增殖旺盛，情況穩(wěn)定，試驗(yàn)效果良好，復(fù)蘇后兩周內(nèi)開(kāi)始凍存一批，再往下傳的用來(lái)做實(shí)驗(yàn)。

細(xì)胞太少

凍存時(shí)細(xì)胞濃度低于1- 5*10^5CELL/VIAL,復(fù)蘇很難成功,原因：細(xì)胞和細(xì)胞間會(huì)又間隙接觸反應(yīng), 解決：離心后調(diào)整細(xì)胞濃度，把細(xì)胞種更小的孔板中.

培養(yǎng)基很黃，凍存細(xì)胞后復(fù)蘇不長(zhǎng)

在細(xì)胞生長(zhǎng)平頂期凍存的細(xì)胞會(huì)在解凍后有幾天停滯狀態(tài)，原因：細(xì)胞在生長(zhǎng)平頂期已經(jīng)停止生長(zhǎng)，凍存后也保持互相間抑制的信號(hào)，解決辦法：用胰酶消化重新鋪板；

細(xì)胞污染或者很多小黑點(diǎn)

凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復(fù)蘇水浴時(shí)會(huì)滲水，造成污染。復(fù)蘇細(xì)胞的時(shí)候盡量避免凍存管接縫處沾水，防止支原體污染，實(shí)驗(yàn)室定期用過(guò)氧化氫熏蒸，細(xì)胞小黑點(diǎn)增多時(shí)用支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，并且及時(shí)清除，趁高溫假給細(xì)胞來(lái)次清潔吧，支原體去除試劑，*防止支原體污染好幫手。

程序降溫盒導(dǎo)致的細(xì)胞復(fù)蘇不活

放在－80 度的凍存盒，壁太薄，細(xì)胞在被迅速降溫，使用普通的凍存液抗氧化和抗凍添加物不夠，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量冰晶殺死細(xì)胞.

推薦品牌無(wú)血清細(xì)胞凍存液，凍存液含有抗氧化因子，可在細(xì)胞凍存時(shí)防止細(xì)胞產(chǎn)生氧化反應(yīng)，給細(xì)胞一個(gè)好的休眠環(huán)境，含有抗凍組分，讓大部分細(xì)胞免受冰晶殺戮，好不好用一下就知道！

-80°存放太久導(dǎo)致的細(xì)胞復(fù)蘇不好

原因：冰箱的溫度難以恒定：開(kāi)門 / 關(guān)門過(guò)于頻繁，冰箱電壓不穩(wěn)等.解決辦法：盡快轉(zhuǎn)入液氮。

液氮不足

液面不能漫過(guò)所有細(xì)胞。解決：定期測(cè)量液氮儲(chǔ)備，保證細(xì)胞全部浸在液面下，小提醒：有幾個(gè)細(xì)胞需要?dú)庀啾４娴?，不能浸入液氮里，挪?xì)胞的時(shí)候需要注意一下。

取錯(cuò)細(xì)胞

找不到 / 拿錯(cuò)凍存管。原因：沒(méi)有標(biāo)記好細(xì)胞，沒(méi)有做好庫(kù)存記錄，解決：凍存細(xì)胞時(shí)在每支凍存管都標(biāo)上細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間，并記錄在冊(cè)。