WB電泳技巧分享

① 清洗玻璃板，去離子水沖，風(fēng)干或烤干（一定要以處女座的精神去嚴(yán)格要求自己把板子洗干凈，相當(dāng)重要） 

② 按說(shuō)明書(shū)配膠。先配下膠（分離膠），一般兩塊板配 10ml 的 10%的膠（20~80kDa 通用）膠的濃度根據(jù)你所需要跑的蛋白的分子量大小決定,混勻后灌膠，立即用正丁醇或無(wú)水乙醇封，待凝固后倒出正丁醇，用去離子水沖洗，濾紙吸干；③ 配上膠（積層膠），參考說(shuō)明書(shū)，一般兩塊板配 4ml 的 5%的膠，混勻后灌膠，插板,待凝固。（可 4°過(guò)夜） 

④ 配電泳液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g，SDS1g，定容至 1L） 

⑤ 將玻璃板裝好放入電泳槽中，加電泳液，輕輕拔梳。 

⑥ 上樣（這是每個(gè)WB達(dá)人最能裝逼的一個(gè)環(huán)節(jié)，高手會(huì)告訴你憑感覺(jué)加樣連孔都不用看） 

⑦ 連接電源，一定要注意紅對(duì)紅，黑對(duì)黑，定電壓和時(shí)間，上膠（90v，約 40min，maker 分出條帶），換壓，下膠（120v，2h）。（不要讓溴酚藍(lán)跑出去）

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：

想要條帶跑的好看點(diǎn)，最好把上膠稍微配高一點(diǎn)。

換電壓主要是看溴酚藍(lán)有沒(méi)有跑到下膠，沒(méi)有確定的時(shí)間點(diǎn)。

膠最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如果需要保存最好用濕潤(rùn)的保鮮膜包好。