轉(zhuǎn)染HGF-1牙齦成纖維細(xì)胞, 質(zhì)粒大小10646bp

1.可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細(xì)胞，懸浮細(xì)胞，如T細(xì)胞，NK細(xì)胞、人淋巴細(xì)胞、THP-1等;

2.可高效率轉(zhuǎn)染sirRNA、小分子到任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞；

3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可10小時(shí)內(nèi)快速代謝的第三代新轉(zhuǎn)染試劑;

轉(zhuǎn)染條件：

細(xì)胞密度：60左右

質(zhì)粒DNA濃度：648ng/ul

質(zhì)粒DNA大?。?0646bp

培養(yǎng)板：6孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量：8ul

質(zhì)粒DNA用量：電訊

轉(zhuǎn)染試劑：AD600150，Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間：48小時(shí)

血清：z7010-500 胎牛血清

細(xì)胞凍存：CE70100T無(wú)血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞活力檢測(cè)：K009-500，cck8

重要指導(dǎo)方針：

-質(zhì)粒DNA必須溶解在ddH 2 O中。如果溶解在Buffer中，轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降70%，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。

-質(zhì)粒DNA必須去內(nèi)毒素，否則轉(zhuǎn)染效率會(huì)下降70%，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。

- 在制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)，不能使用其他試劑稀釋核酸或轉(zhuǎn)染試劑。只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑按照1:1的關(guān)系直接混合即可。否則，轉(zhuǎn)染效率將下降80%，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失敗。

-檢查并與轉(zhuǎn)染試劑混合后，用移液管吹吸10-15次以充分混合，確保管壁無(wú)液體殘留。

- 將核酸與轉(zhuǎn)染試劑混合并在室溫下孵育至少 10-15 分鐘。

- 將復(fù)合物加入細(xì)胞培養(yǎng)板并輕輕混勻，將板置于 CO 2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

- 在整個(gè)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，細(xì)胞可以在*培養(yǎng)基中培養(yǎng)，而不是使用無(wú)血清培養(yǎng)基。

- 如果轉(zhuǎn)染后顯微鏡下觀察到白色或黑色圓形顆粒，則為轉(zhuǎn)染試劑的新材料顆粒。